1. 目的细胞按照标准的细胞培养方案，采用血清培养基进行培养。
2. 检测前一天，使用无血清培养基（0.2% BSA）进行处理。
3. 在无血清培养基培养过夜后，吸出细胞培养基并用PBS进行冲洗。
4. 向细胞中加入胰蛋白酶溶液，从而启动细胞分离步骤。
5. 将细胞悬液转移至试管中，以350×g的离心速度离心5分钟。
6. 将细胞重新悬浮在预热的细胞培养基中。
7. 将细胞悬浮液稀释至100,000个细胞/ml的接种密度。

1. 向接收板的每个孔中添加200μl的培养基，可以选择含有或不含化学引诱剂的培养基（在本例中，不同浓度的FCS从0.25%到10%）。
2. 将上述制备的细胞悬液以50μl的量加入膜板的各孔中。
3. 将细胞培养板置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养24小时。

1. 从接收板的每个孔中吸出细胞培养基。
2. 向接收孔中添加150μl无血清培养基及8μM（在DMSO中稀释）的钙黄绿素AM。
3. 在37°C、5% CO2的细胞培养箱中培养45分钟。
4. 从膜板和接收板的每个孔中吸出细胞培养基。
5. 用PBS冲洗两块板的孔。
6. 向接收板中加入胰蛋白酶溶液，开始促使膜下侧迁移的细胞脱落。
7. 胰蛋白酶溶液孵育10分钟，并轻轻摇动以增强脱离效果。
8. 将每孔180μl的胰蛋白酶细胞悬浮液转移至黑色96孔微孔板的每个孔中。
9. 在激发波长为485nm，发射波长为520nm的读板器中读取荧光。

1. 从膜板的各孔吸出培养基。
2. 使用预湿的棉签，轻轻在顺时针和逆时针方向旋转，以去除膜上部未迁移的细胞。
3. 使用绿色通道的荧光显微镜检测膜下侧迁移细胞的荧光信号。此外，ThinCert®96孔HTS小室因其独特的孔结构而提供高透明度，有助于活细胞观察和更准确、可靠地检查细胞形态与融合情况，及监测污染。

在寻找更好的生物标志物、治疗靶点以及针对肿瘤转移、血管生成和炎症性疾病等复杂现象的药物时，体外细胞迁移实验是不可或缺的工具。这些实验提供了一个可控的环境，用于测量细胞迁移及分析不同分子的影响，例如生长因子和趋化因子，或者候选药物。在迁移实验中，孔径的准确选择至关重要。孔径需与所研究细胞的尺寸成比例，既要具备足够的限制性以防止细胞被动移动，又需具备足够的开放性以便促进其主动迁移。下表展示了一般膜孔径选择的建议。

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